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細(xì)胞刮刀的實(shí)驗(yàn)步驟你要了解嗎

點(diǎn)擊次數(shù):6088 更新時(shí)間:2019-03-07
   細(xì)胞刮刀表面是一個(gè)新型的細(xì)胞培養(yǎng)處理表面,增加了表面濕潤(rùn)的持久性和細(xì)胞吸附的穩(wěn)定性超低吸附板的特征是共價(jià)結(jié)合的水凝膠層將細(xì)胞吸附、蛋白吸附和細(xì)胞的激活降到較低具有凝聚環(huán)的不可逆的蓋減少污染,統(tǒng)一邊角方便堆放帶有字母單孔識(shí)別,平底經(jīng)過(guò)細(xì)胞吸附化處理(標(biāo)注產(chǎn)品除外)經(jīng)過(guò)伽馬射線滅菌,經(jīng)過(guò)無(wú)熱源認(rèn)證。
 
  細(xì)胞刮刀的刀片是由高分子材料TPE制成,長(zhǎng)柄是由高分子材料ABS制成,主要是適用于收獲細(xì)胞,其優(yōu)化設(shè)計(jì),確保對(duì)細(xì)胞損傷,并盡可能接觸細(xì)胞生長(zhǎng)的所有器皿表面。用于人工收獲細(xì)胞,優(yōu)化設(shè)計(jì)確保對(duì)細(xì)胞較小的傷害并盡可能接觸細(xì)胞生長(zhǎng)的所有表面。細(xì)胞刮刀常用于從培養(yǎng)皿中收獲細(xì)胞(尤其是干細(xì)胞)。
 
  細(xì)胞刮刀實(shí)驗(yàn)步驟:無(wú)菌條件下取新生小牛大腦皮層灰質(zhì)部,4℃D-Hank′s液洗滌4次,至無(wú)血跡殘留。剪成1mm3左右的組織碎塊并置于玻璃勻漿器內(nèi),加入兩倍體積的MEM培養(yǎng)基,勻漿上下20次?勻漿液先用100目(直徑149μm)尼龍網(wǎng)布式漏斗抽濾,培養(yǎng)基洗滌4次,收集濾液。然后用200目(直徑74μm)尼龍網(wǎng)布式漏斗抽濾,MEM培養(yǎng)基洗滌4次。細(xì)胞刮刀收集200目尼龍網(wǎng)上的組織(即牛腦微血管),將其置于離心管中,1500r/min離心洗滌10min。離心洗滌的腦微血管懸浮于的0.1%膠原酶中,旋渦振蕩15sec以充分混勻,置于37℃恒溫振蕩水浴箱中振蕩消化50min,取出后旋渦振蕩15sec,1500r/min離心10min,棄上清,用20%BCS的培養(yǎng)基懸浮,接種于明膠鋪被的培養(yǎng)瓶中(培養(yǎng)瓶中加入1%明膠-D-Hank′s液洗滌3ml,37℃孵箱中放置24h,用前倒掉明膠溶液即得明膠覆蓋的培養(yǎng)瓶),置于細(xì)胞培養(yǎng)箱中,37℃、5%CO2、飽和濕度條件下培養(yǎng)。靜置5~7天后,可見少量細(xì)胞生長(zhǎng),20%BCS的MEM培養(yǎng)液換液,以后每2~3天換液一次,至細(xì)胞長(zhǎng)成致密單層后可傳代培養(yǎng)。
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