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簡單了解一下NEST細胞培養(yǎng)有哪些相關問題

點擊次數(shù):1665 更新時間:2020-12-17
   NEST細胞培養(yǎng)包括初代培養(yǎng)及各種細胞系,當生長達到一定密度后,都需做傳代處理。傳代的頻率或間隔與培養(yǎng)液的性質、接種細胞數(shù)量和細胞增殖速度等有關。接種細胞數(shù)量大、細胞基數(shù)大、相同增殖速度條件下,細胞數(shù)量增加與飽和速度相對要快。連續(xù)細胞系和腫瘤細胞系比初代培養(yǎng)細胞增殖快,培養(yǎng)液中血清含量多時細胞增殖比少時快。以上情況都會縮短傳代時間。
 
  NEST細胞培養(yǎng)相關問題:
 
  1、冷凍管應如何解凍?
 
  取出冷凍管后,須立即放入37°C水槽中快速解凍,輕搖冷凍管使其在1分鐘內全部融化,并注意水面不可超過冷凍管蓋沿,否則易發(fā)生污染情形。另冷凍管由液氮桶中取出解凍時,必須注意安全,預防冷凍管之爆裂。
 
  2、細胞冷凍管解凍培養(yǎng)時,是否應馬上去除DMSO?
 
  除少數(shù)特別注明對DMSO敏感之細胞外,絕大部分細胞株(包括懸浮性細胞),在解凍之后,應直接放入含有10-15ml新鮮培養(yǎng)基之培養(yǎng)角瓶中,待隔天再置換新鮮培養(yǎng)基以去除DMSO即可,如此可避免大部分解凍后細胞無法生長或貼附之問題。
 
  3、可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基?
 
  不能。每一細胞株均有其特定使用且已適應之細胞培養(yǎng)基,若驟然使用和原先提供之培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基,細胞大都無法立即適應,造成細胞無法存活。
 
  4、可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之血清種類?
 
  不能。血清是細胞培養(yǎng)上一個極為重要的營養(yǎng)來源,所以血清的種類和品質對于細胞的生長會產生及大的影響。來自不同物種的血清,在一些物質或分子的量或內容物上都有所不同,血清使用錯誤常會造成細胞無法存活。
 
  5、何謂FBS,FCS,CS,HS?
 
  FBS和FCS是相同的意思,兩者都是指胎牛血清,F(xiàn)CS乃錯誤的使用字眼,請不要再使用。CS則是指小牛血清。HS則是指馬血清。
 
  6、培養(yǎng)細胞時應使用5%或10%CO2?或根本沒有影響?
 
  一般培養(yǎng)基中大都使用HCO3-/CO32-/H+作為pH的緩沖系統(tǒng),而培養(yǎng)基中NaHCO3的含量將決定NEST細胞培養(yǎng)時應使用的CO2濃度。當培養(yǎng)基中NaHCO3含量為每公升3.7 g時,細胞培養(yǎng)時應使用10%CO2;當培養(yǎng)基中NaHCO3為每公升1.5g時,則應使用5%CO2培養(yǎng)細胞。
 
  7、何時須更換培養(yǎng)基?
 
  視細胞生長密度而定,或遵照細胞株基本數(shù)據(jù)上之更換時間,按時更換培養(yǎng)基即可。
 
  8、培養(yǎng)基中是否須添加抗生素?
 
  除于特殊篩選系統(tǒng)中外,一般正常培養(yǎng)狀態(tài)下,培養(yǎng)基中不應添加任何抗生素。
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